HIGHLIGHTS Brachiaria brizantha proved to be a promising biomass for ethanol production. Fermentation was not impaired by the inhibitors furfural and hydroxymethylfurfural.

Abstract Obtaining low cost lignocellulolytic enzymes and efficient biomass pretreatment are key to increase the competitiveness of second-generation ethanol in comparison with fossil fuels. The enzymatic cocktail produced by the Chrysoporthe cubensis fungus as well as the mixture prepared with the cocktails of the Chrysoporthe cubensis and Penicillium pinophilum fungi have already proven to be efficient for hydrolyzing biomass pretreated with alkali. In this study, they were evaluated in saccharification of sugarcane bagasse pretreated with dilute acid or hot water at 121°C using an enzyme loading equal to 8 filter paper units per gram of biomass. The most promising results were obtained from the hydrolysis of biomass pretreated with hot water by the C. cubensis-P. pinophilum enzymes blend. In this condition, the glucose and xylose production were 25.2 g.L-1 and 4.6 g.L-1, respectively, that resulted in the conversion of 68% of glucan and 23% of xylan in only 48 hours. This study shows that the hydrothermal pretreatment is a promising alternative to improve the enzymes performance, produced by the fungi C. cubensis and P. pinophilum, in the sugarcane bagasse hydrolysis without the need of chemical compounds, generally used in the acid and alkali pretreatments. Furthermore, the hydrothermal pretreatment for 60 min allowed all cocktails applied to convert the cellulose efficiently with only 24 h of saccharification, which contributes to the energy savings employed in the process.

ABSTRACT Reserve mobilization in seeds occurs after visible germination, which is marked by the protrusion of the radicle or cotyledonary petiole, as in species of Arecaceae. Acrocomia aculeata (macaw palm), usually produces hard seeds whose endosperm has mannan-rich cell walls. We investigated the composition of storage compounds in macaw palm seed and the roles of two enzymes (endo-β-mannanase, α-galactosidase) during and after germination. The seeds were firstly submitted to pre-established protocol to overcome dormancy and promote germination. Enzyme activity in both embryo and endosperm were assayed from the initiation of germinative activities until leaf sheath appearance, and the status of seed structures and reserve compounds were evaluated. Protein content of the embryo decreased with the initiation of imbibition while the lipid content began decreasing six days after removal of the operculum. Increases in enzyme activity and starch content were both observed after visible germination. We suggest that endo-β-mannanase and α-galactosidase become active immediately at germination, facilitating haustorium expansion and providing carbohydrates for initial seedling development. Protein is the first storage compound mobilized during early imbibition, and the observed increase in the starch content of the haustorium was related to lipid degradation in that organ and mannan degradation in the adjacent endosperm.

RESUMO Durante a germinação, uma série de eventos sequenciais ocorre nas sementes em resposta a fatores endógenos e/ou exógenos às mesmas. O objetivo deste trabalho foi investigar as alterações fisiológicas decorrentes da hidratação controlada em água e da temperatura (fatores exógenos) em sementes de Dalbergia nigra (jacarandá-da-bahia). Para tanto, dois lotes de sementes, um de alto e um de baixo vigor foram utilizados nos ensaios. As sementes pertencentes aos dois lotes, após desinfestadas com Captan 0,5%, foram então hidratadas em água, pelo método da atmosfera úmida (umidade relativa de 95-99%), até atingirem quatro níveis de hidratação: 10, 15, 20 ou 25% de teor de água nas sementes, nas temperaturas de 15 e 25ºC. Após os tratamentos foram analisadas as seguintes variáveis: curva de embebição, percentagem de germinação, índice de velocidade (IVG) e condutividade elétrica. Os resultados mostraram que não houve diferença significativa na resposta fisiológica das sementes entre as temperaturas. Por outro lado, para a hidratação verificou-se que até 15% do teor de água aumentou a qualidade fisiológica das sementes de ambos os lotes, que apresentaram maiores valores de germinação, IVG e menores quantidades de compostos lixiviados. A partir de 15% de teor de água verificou-se redução na qualidade das sementes classificadas como de alto vigor, enquanto aquelas de baixo vigor continuaram apresentando respostas positivas em 20 e 25% de teor de água. Diante disto, conclui-se que a técnica de hidratação controlada em água favorece a germinação de sementes de Dalbergia nigra, independentemente do vigor das mesmas. A hidratação no teor de água de 15% é a mais indicada para incrementar a qualidade das sementes. A hidratação nos valores abaixo ou acima resultaram em redução no estímulo.

ABSTRACT During germination, a series of sequential events occur in seeds in response to endogenous and / or exogenous factors. The objective of this study was to investigate the physiological changes resulting from the controlled hydration in water and temperature in seeds of jacaranda-da-bahia (Dalbergia nigra). To this end, two lots of seeds separated as high and low vigor were used in the tests. Seeds belonging to the two lots, after desinfect, were hydrated in water, with the method of humid atmosphere (relative humidity 95-99%) to reach four hydration levels: 10, 15, 20 and 25% moisture content in seeds, in temperatures (exogenous factor) of 15 and 25 ° C. After hydration and temperature treatments, were analyzed the following variables: curve soaking, germination percentage, germination speed index (GSI) and electrical conductivity. The results showed no significant difference in seeds physiological response between the temperatures. On the other hand, for hydration was found that up to 15% moisture content increased the seeds physiological quality of both lots, which showed higher germination values, IVG and smaller amounts of leached compounds. From 15% moisture content were found a reduction in the quality of seeds classified as high vigor, while those of low vigor continued to show positive responses in 20 and 25% humidity. Given this, it is concluded that the technique of controlled hydration in water favors the germination of Dalbergia nigra seeds, independent of the vigor. Hydration moisture content of 15% is more appropriate to increase the seeds quality. The hydration in values below or above resulted in a decrease in the stimulus.

Os objetivos deste trabalho foram investigar o efeito da temperatura sobre a germinação de sementes de Melanoxylon brauna e identificar as temperaturas cardinais de germinação, bem como avaliar a eficiência do teste de condutividade elétrica para determinação das temperaturas cardinais. Para tanto, foram realizados três ensaios. No primeiro, foi feita a determinação das curvas de embebição, em cada temperatura (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 e 45 ºC); as sementes foram pesadas a cada 2 h, por um período de 12 h e após a cada 12 h até a protrusão radicular de 50% das sementes, ou até 120 h quando na ausência de germinação. No segundo ensaio, para identificar as temperaturas cardinais, as sementes foram mantidas sob cada temperatura, por 10 dias, em câmara tipo BOD, sob luz constante. No terceiro ensaio, foi realizado um teste de condutividade elétrica com as sementes incubadas por períodos de 24, 48 e 72 h de embebição em cada uma das temperaturas e, em seguida, colocadas em erlenmeyers com 75 mL de água deionizada a 25 ºC, por 24 h, para posterior leitura da condutividade elétrica. É mais criterioso recomendar faixas de temperaturas para germinação do que temperaturas pontuais. As temperaturas cardinais (teóricas) para a característica porcentagem de germinação são: 12,3 ºC - mínima, 30,0 ºC - ótima (teórica) e 42,7 ºC - máxima. As faixas de temperatura considerando todas as variáveis investigadas são: 12,1-12,6 ºC (mínima); 30,0-35,8 ºC (ótima); e 42,4-43,0 ºC (máxima). A espécie apresenta grande amplitude de germinação com relação à temperatura, sendo verificada a germinação na faixa de 12,0 a 42,0 ºC. O teste de condutividade elétrica foi eficiente para avaliar o efeito da temperatura sobre as sementes e, nesse teste, a temperatura ótima é de 27,0 ºC..

The objective of this study was to investigate the effect of temperature on the germination of Melanoxylonbrauna seeds and identify cardinal temperatures for germination, as well as to evaluate the efficiency of the electrical conductivity test to determine the cardinal temperatures. Therefore, three testswere performed. In the first test, the determination of imbibition curves was performed at each temperature (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 and 45ºC), the seeds were weighed every two hours for a period of 12 hours and after every 12 hours until the root protrusion of 50% of the seeds, or 120 hours when there was no germination. In the second test, to identify the cardinal temperatures, seeds were kept under each temperature for a period of 10 days in DBO under constant light. In the third test, an electrical conductivity test was performed with the seeds incubated for 24, 48 and 72 hours of imbibition in each of the temperatures, and then were placed inerlenmeyer flasks with 75 mL of deionized water at 25ºC for 24 hours for subsequent reading of the electrical conductivity. It is more judicious to recommend temperature ranges for germination than punctual temperatures. The cardinal temperatures (theoretical) for the characteristic germination rates are: 12.3ºC - minimum - 30.0ºC optimal (theoretical) and 42.7ºC maximun. The temperature ranges considering all the variables investigated were: 12.1 to 12.6ºC (minimum); 30.0-35.8ºC (optimum) and 42.4-43.0ºC (maximum). The specie has a wide range of germination with respect to temperature, and germination was observed in the temperature range from 12.0 to 42.0ºC. The electrical conductivity test was efficient to evaluate the effect of temperature onseeds and according to this test the optimal temperature is 27.0ºC.

Objetivou-se, com este trabalho, investigar o efeito da temperatura sobre o metabolismo oxidativo, por meio da atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), ascorbato peroxidase (APX) e catalase (CAT) no eixo embrionário e no endosperma micropilar de sementes de Melanoxylon brauna Schott, durante a germinação. As sementes foram semeadas em rolos de papel germitest umedecidos com água destilada e submetidas às temperaturas constantes de 15, 25, 30 e 40ºC, durante 10 dias. As determinações das atividades das enzimas SOD, APX e CAT foram feitas nas sementes colocadas para germinar sob as mesmas condições descritas acima e a cada 12 horas foram retiradas amostras até a protrusão radicular de 50% das sementes ou 168 horas para a temperatura de 15ºC. Não foram detectadas atividades das enzimas SOD, APX e CAT no endosperma micropilar nas diferentes temperaturas. No eixo embrionário, as atividades das enzimas SOD e CAT apresentaram maiores alterações ao longo da germinação em 15ºC e 40ºC, demonstrando que temperaturas estressantes provocam danos oxidativos. A atividade da enzima APX, no eixo embrionário, não foi afetada pela temperatura ao longo da germinação e sua atividade foi extremamente baixa.

The objective of this study was to investigate the effect of temperature on the oxidative metabolism through the activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD), ascorbate peroxidase (APX) and catalase (CAT) in the embryonic axis and micropylar endosperm of Melanoxylon brauna Schott seeds during germination. The seeds were sown in paper rolls germitest moistened with distilled water and subjected to constant temperatures of 15, 25, 30 and 40ºC for 10 days. Measurements of the activities of enzymes SOD, APX and CAT were made in the seeds germinated under the same conditions described above, and every 12 hours until the samples were taken root protrusion of 50% of the seeds or 168 hours for the temperature 15ºC. There were no activities of the enzymes SOD, APX and CAT in the micropylar endosperm at different temperatures. In the embryonic axis, the activities of the enzymes SOD and CAT showed greater changes over the germination of 15ºC and 40ºC, demonstrating that temperature stress causes oxidative damage. The APX enzyme activity in the embryonic axis was not affected by temperature during germination and its activity was extremely low.

A embebição das sementes é o passo inicial do processo de germinação, que se caracteriza pela hidratação de tecidos e células, ativando e/ou induzindo a síntese de enzimas responsáveis pela mobilização das reservas, para atender as necessidades de respiração e a construção de novas estruturas celulares. Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar as alterações nas substâncias de reservas durante a hidratação lenta em água de sementes de jacarandá-da-bahia (Dalbergia nigra). Sementes pertencentes a dois lots distintos (lots I e II) foram colocadas para hidratar em dessecadores saturados (95-99% UR) nas temperaturas de 15 e 25 °C até atingirem os teores de água de 10, 15, 20 e 25% de umidade. Em cada nível de hidratação foram avaliadas as variações nas reservas de lipídios, carboidratos solúveis, amido e proteínas solúveis. A mobilização de reservas ocorreu de maneira similar nos dois lotes avaliados, porém não foram observadas diferenças entre as duas temperaturas de hidratação. Os teores de lipídios apresentaram pequena variação durante a hidratação, enquanto os conteúdos de carboidratos solúveis e amido apresentaram decréscimo a partir do nível de hidratação de 15%. Proteínas solúveis exibiram tendência gradativa de queda, desde a testemunha (sementes secas) até o nível de 25% de umidade.

Seed imbibitions is the first stage of the germination process and is characterized by the hydration of tissues and cells and the activation and/or induction of the enzymes responsible for mobilizing reserves for respiration and the construction of new cell structures. The objective of this study was to investigate the alterations in reserve substances during slow hydration of Bahia Rosewood (Dalbergia nigra) seeds in water. Seeds from two different lots (Lot I and II) were placed in saturated desiccators (95-99% RH) to hydrate at 15 and 25 °C until water contents of 10, 15, 20 and 25% were reached. At each level of hydration, changes in lipid reserves, soluble carbohydrates, starch and soluble proteins were evaluated. The mobilization of reserves was similarly assessed in both lots, with no differences being observed between the two hydration temperatures. Lipid contents showed little variation during hydration, while the contents of soluble carbohydrates and starch decreased after the 15% water content level. Soluble proteins showed a gradual tendency to decrease between the control (dry seeds) up to 25% water content.

A germinação é um processo que se inicia com a absorção de água pelas sementes, estimulando a síntese de enzimas ou ativação daquelas pré-existentes. O objetivo deste trabalho foi estudar as variações nas reservas de monossacarídeos e atividades das enzimas α-galactosidase e poligalacturonase durante a hidratação de sementes de dois lotes de Dalbergia nigra (jacarandá-da-Bahia). Para tanto, sementes de duas procedências constituíram os lotes I e II, classificados como de alto e baixo vigor, respectivamente. Os lotes foram colocados para hidratar em dessecadores com alta umidade relativa nas temperaturas de 15 e 25 °C até atingirem os níveis de hidratação de 10, 15, 20 e 25% de umidade nas sementes. Os teores de monossacarídeos e as atividades das enzimas foram analisados nos cotilédones das sementes. Os teores de ramnose e xilose apresentaram valores superiores na testemunha, com redução durante a hidratação até 15%, momento a partir do qual aumentaram novamente, em ambos os lotes. O lote I, de qualidade superior, possui maior síntese e degradação de glicose durante a hidratação das sementes. Ambas as enzimas mostraram ser pré-formadas, por já apresentarem atividade nas sementes sem embebição. A poligalacturonase aumentou e a α-galactosidase manteve-se relativamente constante durante a hidratação das sementes.

Germination is a process that begins with seed water uptake, stimulating enzyme synthesis or activating enzymes already present. The objective of this study was to evaluate variations in monosaccharide reserves and the activities of the α-galactosidase and polygalacturonase enzymes during the hydration of two lots of Dalbergia nigra (Bahia Rosewood) seeds. Seeds from different origins constituted the two lots I and II, classified as high and low vigor, respectively. Both lots were placed in desiccators with a high relative humidity to hydrate and at 15 and 25 °C until levels of 10, 15, 20 and 25% moisture levels in seeds were reached. The seed cotyledons were analyzed for the quantity of monosaccharides and enzyme activity. The control had higher concentrations of xylose and rhamnose, which decreased during hydration until the 15% level was reached, after which concentrations increased again in both lots. Lot I, with a superior quality, showed higher glucose synthesis and degradation during seed hydration. Both enzymes were pre-existing since activity was already present in the seeds without imbibition. The polygalacturonase enzyme increased and the α-galactosidase enzyme remained relatively constant during seed hydration.

Duas α-galactosidases (P1 e P2) e uma invertase produzidas no sobrenadante da cultura do fungo Aspergillus terreus quando crescido por 168 h a 28ºC com farelo de trigo como fonte de carbono foram parcialmente purificadas por cromatografias de gel filtração e interação hidrofóbica. O pH e temperatura ótimos para as preparações P1, P2 e invertase foram entre 4,5-5,0, 5,5 e 4,0 e 60, 55 e 65ºC, respectivamente. O K M app para Ï�-nitrofenil-α-D-galactopiranosideo foi 1.32 mM e 0.72 mM para P1 e P2, respectivamente. O valor de K M app para invertase usando sacarose como substrato foi de 15,66 mM. As preparações enzimáticas P1 e P2 mantiveram suas atividades após 3 h de pré-incubação a 50 ºC e a invertase manteve cerca de 90% após 6 h a 55 ºC. P1 e P2 foram diferentemente sensíveis à inibição por Ag+, D-galactose e SDS. As preparações enzimáticas hidrolisaram os galactooligossacarídeos presentes em melaço de soja.

Two α -galactosidase (P1 and P2) and one invertase present in the culture of Aspergillus terreus grown on wheat straw for 168 h at 28ºC were partially purified by gel filtration and hydrophobic interaction chromatographies. Optimum pH and temperatures for P1, P2 and invertase preparations were 4.5-5.0, 5.5 and 4.0 and 60, 55 and 65ºC, respectively. The K M app for Ï� -nitrophenyl-α -D-galactopyranoside were 1.32 mM and 0.72 mM for P1 and P2, respectively, while the K M app value for invertase, using sacarose as a substrate was 15.66 mM. Enzyme preparations P1 and P2 maintained their activities after pre-incubation for 3 h at 50ºC and invertase maintained about 90% after 6 h at 55 ºC. P1 and P2 presented different inhibition sensitivities by Ag+, D-galactose, and SDS. All enzyme preparations hydrolyzed galacto-ologosaccharides present in soymolasses.

Um experimento foi conduzido com pintos de corte macho para o estudo dos efeitos dos níveis de 20 e 23% de PB combinados com 0, 50, 100, 150, 200, 250 mEq/kg de balanço dietético eletrolítico (BDE) sobre a atividade da alfa-amilase pancreática de frangos de corte de 1 a 21 dias de idade. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado. Dietas e água foram fornecidas ad libitum. Aos 1, 7, 14 e 21 dias, três aves de cada tratamento foram sacrificadas por deslocamento cervical para remoção do pâncreas, o qual foi removido, homogeneizado, congelado em nitrogênio líquido e liofilizado. Uma alíquota de cada amostra foi solubilizada em água deionizada e centrifugada a 7500 x g por 3 minutos a 4ºC, para determinação da atividade da alfa-amilase no sobrenadante. Aves alimentadas com 20% de PB apresentaram atividades específicas (U/mg de proteína) superiores à daquelas que receberam 23%, exceto para os níveis de BDE de 100 a 200 mEq/kg, aos 14 dias. Observou-se tendência de aumento da atividade específica dos 7 aos 14 dias e redução dos 14 aos 21 dias. Para maior atividade específica de alfa-amilase, recomendam-se dietas com 20% de PB e 200 mEq/kg de BDE na fase pré-inicial e dietas com 20% de PB e 135 a 250 mEq/kg de BDE para frangos de corte dos 8 aos 21 dias de idade.

An experiment was conducted with male broiler chicks to study the effects of 20 and 23% of crude protein (CP) combined with 0, 50, 100, 150, 200, 250 mEq/kg of dietary electrolytic balance (DEB) on the pancreatic alpha-amylase activity from 1 to 21 days. A completely randomized factorial design was used. Feed and water were supplied ad libitum. At days 1, 7, 14 and 21, three birds from each treatment were sacrificed by cervical dislocation, pancreas were removed, homogeneized and frozen in liquid nitrogen which were then freeze-dried. An aliquot of each sample was solubilized with deionized water and centrifuged at 7500 x g for three minutes at 4ºC. Activities of the pancreatic alpha-amylase in the supernatants were determined. Chicks fed 20% of CP showed specific activities (U/mg protein) higher than those fed 23%, except for DEB levels from 100 to 200 mEq/kg at 14 days. A tendency to increase specific activity was observed from 7 to 14 days and to reduce from 14 to 21 days. The highest specific activity of pancreatic alpha-amylase was observed in diets with 20% CP and 200 mEq/kg of DEB from 1 to 7 days, diets with 20% of CP and 135 to 250 mEq/kg of DEB from 8 to 21 days of age.

Este trabalho objetivou foi determinar a composição bioquímica de sementes de espécies florestais e caracterizar a enzima alfa-galactosidase de sementes germinadas de Platymiscium pubescens. Os maiores teores de lipídios foram determinados em sementes de Chorisia speciosa, Caesalpinia peltophoroides, Tabebuia serratifolia e Tabebuia velanedae, enquanto sementes de Enterolobium contortisiliquum, Schizolobium parahyba e Cassia grandis apresentaram os maiores teores protéicos. A alfa-galactosidase catalisa a hidrólise dos oligossacarídeos de rafinose, em sementes de leguminosas, durante a germinação. A maior atividade da alfa-galactosidase foi detectada em sementes de Platymiscium pubescens após 72 h de embebição. Duas formas de alfa-galactosidases, C1 e C2, foram purificadas de sementes germinadas de P. pubescens, usando-se fracionamento com sulfato de amônio e cromatografias de filtração em gel e de afinidade. Essas enzimas apresentaram atividade máxima em pH 5,5 e a 50-55 ºC. Os valores de Km ap das formas C1 e C2, para o substrato ro-nitrofenil-alfa-D-galactopiranosídeo, foram de 0,54 mM e 0,78 mM, e para a rafinose, de 4,64 mM e 5,09 mM, respectivamente. Essas enzimas exibiram estabilidade térmica moderada, mantendo 70% da atividade original após 3 h de incubação a 45 ºC. A atividade enzimática da C1 e C2 foi totalmente perdida na presença de CuSO4 e dodecil sulfato de sódio (SDS). Tais enzimas também hidrolisaram melibiose, rafinose e estaquiose, indicando potencial para aplicações biotecnológicas.

The objective of this work was to determine seed biochemical composition of forest species and to characterize alpha-galactosidase enzyme of germinated seeds of Platymiscium pubescens. The highest lipid levels were found in seeds of Chorisia speciosa, Caesalpinia peltophoroides, Tabebuia serratifolia and Tabebuia velanedae, whereas seeds of Enterolobium contortisiliquum, Schizolobium parahyba and Cassia grandis showed the highest protein levels. alpha-galactosidase catalyzes the hydrolyzis of raffinose oligossacarides in legume seeds during germination. The highest activity of alpha-galactosidase was found in seeds of Platymiscium pubescens after 72 h of soaking in the water. Two forms of alpha-galactosidases, C1 and C2, were purified from germinated seeds of P. pubescens, using partition with ammonium sulfate, and gel filtration and affinity chromatographies. These enzymes presented maximum activity at pH 5.5, 50-55ºC. Km ap values in the C1 and C2 forms forrho-nitrophenyl-alpha-D-galactopyranoside substrate were 0.54 mM and 0.78 mM, and 4.64 mM and 5.09 mM for raffinose, respectively. These enzymes showed moderate thermal stability, maintaining 70% of the original activity after 3 h incubation at 45ºC. The C1 and C2 enzymatic activity was totally lost in the presence of CuSO4 and sodium dodecyl sulfate (SDS). These enzymes also hydrolyzed melibiose, raffinose and stachyose, indicating a potential for biotechnological applications.

O fungo termofílico Aspergillus fumigatus secreta as enzimas invertase (beta-frutofuranosidase) e alfa-galactosidase (alfa-D-galactosídeo galactohi-drolase) que estão envolvidas na hidrólise completa dos oligossacarídeos de rafinose. A enzima alfa-galactosidase foi produzida em meio de cultura do fungo Aspergillus fumigatus crescido por 36 h a 42 °C em meio mineral mínimo contendo os açúcares galactose, ou melibiose, ou rafinose como fontes de carbono. A enzima foi purificada por filtração em gel, seguida por duas cromatografias de troca iônica. A massa molecular da alfa-galactosidase determinada por SDS-PAGE foi de 54,7 kDa. A atividade máxima da enzima purificada, utilizando o substrato ro-nitrofenil-alfa-D-galactopiranosídeo (roNPGal) foi na faixa de pH entre 4,5 e 5,5 e a 55 °C. A enzima manteve aproximadamente 80% de sua atividade original mesmo após pré-incubação por 90 minutos a 50 °C. O valor de KM para o substrato roNPGal foi 0,3 mM. A enzima foi capaz de hidrolisar melibiose, mas sua atividade foi muito reduzida na presença do substrato rafinose.

Aspergillus fumigatus secreted invertase (beta-fructofuranosidase) and alpha-galactosidase enzymatic activities able to hydrolyzing raffinose oligosaccharides (RO). alpha-Galactosidase was induced by galactose, melibiose and raffinose, but galactose was the most efficient inducer. It was purified by gel filtration and two ion exchange chromatographies and showed Mw of 54.7 kDa. The purified enzyme showed maximal activity against p-nitrophenyl-alpha-D-galactopyranoside (pNPGal) at pH 4.5-5.5 and 55 °C, and retained about 80% of the original activity after incubation for 90 minutes at 50ºC. The KM for pNPGal was 0.3 mM. Melibiose was hydrolyzed by the enzyme but raffinose was very poor substrate.